地点：安徽省疾病预防控制中心毒理科病媒生物检测实验　　

　　背景：鼠类不仅传播鼠疫、流行性出血热、钩端螺旋体病、斑疹伤寒等多种疾病，严重危害人类健康;而且通过啮咬、盗食、污染等方式给工业、农牧业生产等造成直接或间接的经济损失。在此背景下，通过深入细致的调研工作，了解鼠类防制技术规范的现状，并在遵循相关国家、行业标准的基础上，编制符合深圳市特点的鼠类防制技术规范，有助于安全、有效地预防和控制鼠类，保护人民群众身体健康和生 命安全，提升安徽省的环境卫生水平。　　

一、材料和方法：　

　　样品来源于居民区及收治医院周 围 环 境 采 集 目 标 病 媒 生 物。160份鼠肺样品来自本地，15份蜚蠊体表擦拭子来自安徽等地。所有样品均冻存于-80度待检。　　

二、仪器及试剂：　　

　　1、浙江优嘉全自动样品冷冻研磨仪　　

　　2、荧光定量PCR分析仪　　

　　3、高效病毒浓缩试剂盒　　

　　4、巢式RT-PCR所采用的引物，一步法RT-PCR试剂盒　　

　　5、RNA提取试剂盒

　　样品RNA的提取别取待检鼠肺组织于全自动样品冷冻研磨仪充分再加入异硫酸氰胍溶液，充分溶解后于负20度保存备用，蜚蠊体表擦拭子中加入无菌生理盐水少许于4度中过夜，挤压后取出棉拭子，将剩余液体10000r/min离心5min，其上清液则用高效病毒浓缩试剂盒进行浓缩，浓缩所得的晶体中再加入异硫酸氰胍溶液，充分溶解后于负20度保存备用，按照试剂盒的说明 从样品的异硫酸氰胍溶液中提取提取所得的RNA于负20度中保存备用。　　

实验步骤：　　

　　1、准备全自动样品冷冻研磨仪。　

　　2、金属适配器，以及钢珠适配器。　　

　　3、将老鼠组织剪碎，放入研磨管，加入钢珠。　　

　　4、将适配器装入研磨仪中，开启低温功能保持温度。　　

　　5、设定参数，启动仪器至研磨程序结束，可得到如图所示样品。

　　

仪器介绍：

　　

　　全自动样品冷冻研磨仪：一种快速、高效、制冷的研磨系统。它能在非常短的时间内将土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等样品完成研磨、粉碎、混合机细胞破壁。广泛应用于生命科学、医药、生化、环境、地质、农业、林业、质检、材料等领域。　　

优势：　　

　　研磨效果具有高度可重现性、触屏操作，可存储10条参数、能够有效抑制核酸降解，保留蛋白质活性、研磨时处于全封闭状态，无交叉污染，低噪音、可轻松处理高韧塑料、高强塑料、树脂等难研磨样品、具备安全罩及安全锁，无需涉及液氮操作，安全性高。